Posted by on 11 kwietnia 2018

Szczotkę usunięto, a cząstki stałe granulowano przez 20 minut przy 2000 x g w 4 ° C i zamrożono w -80 ° C. Próbki osadu węchowej błony rozmrożono i odwirowano przez 10 minut przy 3220 xg w 4 ° C. Pozostały supernatant usunięto i do peletki zanurzono jednorazową pętlę inokulacyjną (Fisherbrand) w celu przeniesienia około do 2 ?l peletki do probówki zawierającej 25 ?l PBS. Tę ostatnią rurkę poddano działaniu ultradźwięków aż do zdyspergowania peletki i dalszego rozcieńczenia, jak to określono, w SDS-PBS-N2. Analiza RT-QuIC
W doświadczeniach z użyciem szczepów 2 ?l rozcieńczeń homogenatu mózgu w SDS-PBS-N2 dodawano do 48 ?l osadu pachwiny węchowej po tym, jak ten ostatni został rozcieńczony, jak opisano powyżej, w SDS-PBS-N2. Reakcje RT-QuIC przeprowadzono w sposób opisany uprzednio18 za pomocą 2 ?l wzbogaconej błony węchowej rozcieńczonej jako nasiona i pełnej długości resztki PrP chomika od 23 do 231 jako substratu rP rPSen. Całkowita objętość reakcji wynosiła 100 ?l. Do analizy aktywności endogennego zaszczepiania użyto 2 ?l rozcieńczonej błony węchowej lub homogenatu mózgu lub 20 ?l nierozcieńczonego płynu mózgowo-rdzeniowego do zaszczepienia reakcji. Reakcje RT-QuIC poddano cyklom wytrząsania i odpoczynku w 42 ° C przez 55 do 90 godzin, jak opisano powyżej.18 Kryteria do odróżniania testów pozytywnych od negatywnych RT-QuIC próbek płynu mózgowo-rdzeniowego i błony węchowej wyjaśniono w części dotyczącej metod. w dodatkowym dodatku.
Analiza statystyczna
Porównania statystyczne średnich odpowiedzi względnych fluorescencji ThT w próbkach od pacjentów zi bez choroby Creutzfeldta-Jakoba przeprowadzono z niesparowanymi t-testami. Obliczenia 95% przedziałów ufności dla wrażliwości i swoistości przeprowadzono za pomocą procedury Wilsona
Wyniki
RT-QuIC Analiza próbek błony śluzowej wzbogaconych tkanką mózgową
Szczotkowani e sklepienia nosowego (ryc. S1A w dodatkowym dodatku) dostarczyło próbki zawierające klastry neuronów węchowych (ryc. S1B i S1C w dodatkowym dodatku) oprócz komórek rzęsatych oddechowych i kilku granulocytów i monocytów (dane nie pokazane). Zerwanie próbki błony węchowej od pacjenta bez choroby Creutzfeldta-Jakoba z homogenatem mózgu od pacjenta ze sporadyczną chorobą Creutzfeldta-Jakoba, rozcieńczonego 4 × 10-7 i 4 × 10-8 (zawierającego około 20 femtogramów i odpowiednio około 2 femtogramy PrPCJD opornego na proteazę) wywoływały silną fluorescencję ThT, przy czym bardziej stężony homogenat mózgowy dawał szybszą kinetykę amplifikacji (ryc. S2 w dodatku uzupełniającym) [patrz też: Laserowe usuwanie blizn, olej do włosów, oczyszczanie organizmu ]

Powiązane tematy z artykułem: Laserowe usuwanie blizn oczyszczanie organizmu olej do włosów

Posted by on 11 kwietnia 2018

Szczotkę usunięto, a cząstki stałe granulowano przez 20 minut przy 2000 x g w 4 ° C i zamrożono w -80 ° C. Próbki osadu węchowej błony rozmrożono i odwirowano przez 10 minut przy 3220 xg w 4 ° C. Pozostały supernatant usunięto i do peletki zanurzono jednorazową pętlę inokulacyjną (Fisherbrand) w celu przeniesienia około do 2 ?l peletki do probówki zawierającej 25 ?l PBS. Tę ostatnią rurkę poddano działaniu ultradźwięków aż do zdyspergowania peletki i dalszego rozcieńczenia, jak to określono, w SDS-PBS-N2. Analiza RT-QuIC
W doświadczeniach z użyciem szczepów 2 ?l rozcieńczeń homogenatu mózgu w SDS-PBS-N2 dodawano do 48 ?l osadu pachwiny węchowej po tym, jak ten ostatni został rozcieńczony, jak opisano powyżej, w SDS-PBS-N2. Reakcje RT-QuIC przeprowadzono w sposób opisany uprzednio18 za pomocą 2 ?l wzbogaconej błony węchowej rozcieńczonej jako nasiona i pełnej długości resztki PrP chomika od 23 do 231 jako substratu rP rPSen. Całkowita objętość reakcji wynosiła 100 ?l. Do analizy aktywności endogennego zaszczepiania użyto 2 ?l rozcieńczonej błony węchowej lub homogenatu mózgu lub 20 ?l nierozcieńczonego płynu mózgowo-rdzeniowego do zaszczepienia reakcji. Reakcje RT-QuIC poddano cyklom wytrząsania i odpoczynku w 42 ° C przez 55 do 90 godzin, jak opisano powyżej.18 Kryteria do odróżniania testów pozytywnych od negatywnych RT-QuIC próbek płynu mózgowo-rdzeniowego i błony węchowej wyjaśniono w części dotyczącej metod. w dodatkowym dodatku.
Analiza statystyczna
Porównania statystyczne średnich odpowiedzi względnych fluorescencji ThT w próbkach od pacjentów zi bez choroby Creutzfeldta-Jakoba przeprowadzono z niesparowanymi t-testami. Obliczenia 95% przedziałów ufności dla wrażliwości i swoistości przeprowadzono za pomocą procedury Wilsona
Wyniki
RT-QuIC Analiza próbek błony śluzowej wzbogaconych tkanką mózgową
Szczotkowani e sklepienia nosowego (ryc. S1A w dodatkowym dodatku) dostarczyło próbki zawierające klastry neuronów węchowych (ryc. S1B i S1C w dodatkowym dodatku) oprócz komórek rzęsatych oddechowych i kilku granulocytów i monocytów (dane nie pokazane). Zerwanie próbki błony węchowej od pacjenta bez choroby Creutzfeldta-Jakoba z homogenatem mózgu od pacjenta ze sporadyczną chorobą Creutzfeldta-Jakoba, rozcieńczonego 4 × 10-7 i 4 × 10-8 (zawierającego około 20 femtogramów i odpowiednio około 2 femtogramy PrPCJD opornego na proteazę) wywoływały silną fluorescencję ThT, przy czym bardziej stężony homogenat mózgowy dawał szybszą kinetykę amplifikacji (ryc. S2 w dodatku uzupełniającym) [patrz też: Laserowe usuwanie blizn, olej do włosów, oczyszczanie organizmu ]

Powiązane tematy z artykułem: Laserowe usuwanie blizn oczyszczanie organizmu olej do włosów